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    尼康顯微鏡成像CCD信號(hào)與噪聲比

    2020-09-03 14:42:26

     對(duì)于任何電子測(cè)量系統(tǒng)中, 信號(hào)-噪聲比(SNR)表征了測(cè)量的質(zhì)量,并且確定該系統(tǒng)的*終性能。 CCD(電荷耦合器件)圖像傳感器,所述SNR值具體地表示所測(cè)量的光信號(hào)的比值,以合并的噪聲,它由電子系統(tǒng)中所產(chǎn)生的不期望的信號(hào)分量,并且與入射光子通量的固有的自然變化。 因?yàn)橐粋€(gè)CCD傳感器通過(guò)離散的物理位置的一個(gè)陣列收集電荷,信號(hào)與噪聲的比可以被認(rèn)為是相對(duì)信號(hào)強(qiáng)度,相對(duì)于測(cè)量的不確定性,在每個(gè)像素的基礎(chǔ)。 在CCD成像系統(tǒng)噪聲的三個(gè)主要來(lái)源是光子噪聲 , 暗噪聲讀取噪聲 ,所有這些都在SNR計(jì)算必須考慮。

    本教程與初始化的信號(hào)噪聲比為一體化的函數(shù)的假設(shè)CCD系統(tǒng)具有典型的規(guī)格在顯微成像應(yīng)用中使用的高性能相機(jī)(曝光)時(shí)間的圖形繪圖的顯示。 影響信號(hào)噪聲比CCD傳感器參數(shù)可以改變通過(guò)使用鼠標(biāo)重新定位的任何位置顯示窗口下方的滑塊建模教程系統(tǒng)。 作為各變量改變時(shí),信號(hào) - 噪聲比的計(jì)算值在左側(cè)黃色框被更新。 在與電子傳感器,包括CCD的圖像采集,顯然隨機(jī)波動(dòng)信號(hào)強(qiáng)度構(gòu)成的噪聲疊加在信號(hào)上,并作為噪聲的幅度增加,在所測(cè)量的信號(hào)不確定性變得更大。 變化直接影響信號(hào)電平的因素作出,并且這些變量主要貢獻(xiàn)噪聲的系統(tǒng)中,對(duì)信噪比的逆效應(yīng),這反映在所顯示的值。 大信號(hào)噪聲比是很重要的收購(gòu)高質(zhì)量的數(shù)字圖像,并在需要精確的光測(cè)量應(yīng)用中尤為關(guān)鍵。 標(biāo)記的分級(jí)因子的單選按鈕可單獨(dú)選擇,以使信號(hào)對(duì)噪聲比的改善與科學(xué)CCD相機(jī),其中從鄰近像素組的信號(hào)產(chǎn)生的電荷的讀出過(guò)程中,組合成較大的“superpixels”常用的方法。 的分級(jí)因子代表的像素被組合以形成更大的每個(gè)像素的數(shù)目。 當(dāng)SNR被重新計(jì)算,以反映分塊操作中,假定該信號(hào)是相同的組內(nèi)的每一個(gè)象素。

    來(lái)自CCD成像系統(tǒng),在計(jì)算SNR利用測(cè)得的信號(hào),依賴于光子通量入射到CCD(表示為每像素的光子每秒),設(shè)備(其中,1表示100%的效率)的量子效率,并且集成在其上的信號(hào)被收集(曝光)時(shí)間(秒)。 這三個(gè)變量的乘積確定的信號(hào) - 噪聲比,這是權(quán)衡有助于比率的分母項(xiàng)的所有的噪聲源的信號(hào)部分(分子)。 本教程中的量子效率滑塊提供了20%到98%的調(diào)整范圍, 光子通量滑塊允許選擇每像素0.1和10000光子每秒之間的入射光水平。 積分時(shí)間滑塊調(diào)整CCD的積分時(shí)間在一定范圍為0.1至100秒。

    提供用于改變CCD規(guī)格為讀出噪聲 (每像素2?20的電子有效值)和暗電流 (每秒每像素0.01?50電子)滑塊。 對(duì)總噪聲的光子噪聲的貢獻(xiàn)是信號(hào)電平的函數(shù),而不是一個(gè)獨(dú)立的噪聲變量,可以通過(guò)相機(jī)的設(shè)計(jì)或操作方法會(huì)降低,但被占的SNR計(jì)算。 右手黃色數(shù)值字段(檢測(cè)到的光子/像素 ),顯示信號(hào)的光子的總數(shù)中讀出由CCD每個(gè)像素*過(guò)目前由滑塊設(shè)置積分周期。 此值表示光子通量,量子效率和積分時(shí)間的乘積。 五個(gè)滑塊的操作,在與相鄰的幾個(gè)單選按鈕的同時(shí),產(chǎn)生了一系列對(duì)應(yīng)于大多數(shù)操作條件下可能在利用CCD攝像機(jī)設(shè)計(jì)用于低光成像在顯微鏡中可能遇到的信號(hào) - 噪聲比的值。 當(dāng)教程*初加載或復(fù)位時(shí),滑塊的位置預(yù)設(shè)為,是典型用于利用冷卻CCD高性能科學(xué)級(jí)攝像機(jī)系統(tǒng)的值。

    三個(gè)主要的不希望的信號(hào)成分(噪聲),這會(huì)降低一CCD成象裝置通過(guò)降低信號(hào)噪聲比的性能,被認(rèn)為是在計(jì)算總SNR:

    光子噪聲 (有時(shí)也被稱為散粒噪聲 ),從在光子入射到CCD上的到達(dá)速率的固有統(tǒng)計(jì)變化的結(jié)果。 在半導(dǎo)體器件內(nèi)產(chǎn)生的光電子構(gòu)成的信號(hào),其大小是由遵循的光子入射到CCD上的泊松統(tǒng)計(jì)分布在給定的位置的波動(dòng)擾動(dòng)。 光子噪聲或測(cè)量變差,因此相當(dāng)于該信號(hào)的平方根。

    暗噪聲來(lái)自于CCD,它是獨(dú)立的光子引起的信號(hào)的,但高度依賴于器件溫度的硅結(jié)構(gòu)內(nèi)的熱產(chǎn)生的電子的數(shù)量的統(tǒng)計(jì)變化。 生成熱電子在給定的CCD溫度的速率被稱為暗電流 。 在相似的光子噪聲,暗噪聲服從泊松關(guān)系到暗電流,并且等效于圖像的曝光時(shí)間內(nèi)所產(chǎn)生的熱電子的數(shù)量的平方根。 冷卻CCD降低了暗電流顯著,并且在實(shí)踐中,高性能的攝像機(jī)通常冷卻到的溫度下的暗電流是可以忽略不計(jì)了一個(gè)典型的曝光間隔。(本文來(lái)源:尼康顯微鏡成像CCD信號(hào)與噪聲比

    讀噪聲是固有的變換的CCD的電荷載體轉(zhuǎn)化為量化的電壓信號(hào)的處理系統(tǒng)的噪聲分量,并且隨后的處理和模擬-數(shù)字轉(zhuǎn)換的組合。 讀取噪聲的主要貢獻(xiàn)通常起源于芯片上的前置放大器,并且該噪聲是均勻地加入到每一個(gè)圖像像素。 高性能攝像系統(tǒng)利用增強(qiáng)型設(shè)計(jì),大大降低噪音閱讀的意義。

    該CCD信號(hào)與噪聲的比值計(jì)算在本教程中使用下面的公式

    SNR = PQet / [ PQet + Dt + Nr2 ]1/2

    其中P是入射的光子通量(光子/像素/秒),Q(E)表示CCD的量子效率,t為積分時(shí)間(秒),D是暗電流值(電子/像素/秒)  N (R)代表讀取噪聲(有效值電子/像素)。

    檢查表明,上面的方程簡(jiǎn)單地構(gòu)造為在曝光時(shí)由歸屬于前面所述的三個(gè)噪聲分量的組合的噪聲分頻后的總信號(hào)的比值。 三個(gè)噪聲源不相關(guān),而分母采用為每個(gè)噪聲分量相應(yīng)的值用于光子噪聲信號(hào)賬戶的平方根,暗噪聲等效的暗電流和積分時(shí)間的乘積的平方根,和N(R)-平方對(duì)應(yīng)于所讀取的噪聲分量的平方根。

    信噪比(SNR)使用以前的公式計(jì)算假設(shè)信號(hào)是光的*來(lái)源。 的不必要的背景光的各種來(lái)源,如分散在所述成像系統(tǒng)中,可能產(chǎn)生噪聲,并且如果顯著,這個(gè)背景光子通量(B)必須被添加到該光子噪聲成分如下

    SNR = PQet / [(P + B)Qet + Dt + Nr2 ]1/2

    應(yīng)當(dāng)考慮的另一個(gè)因素是,事件和背景光子通量,和量子效率的值是波長(zhǎng)的函數(shù),并且當(dāng)寬帶照明源被采用時(shí),信號(hào) - 噪聲比的計(jì)算需要這些變量被集成多用于成像的所有波長(zhǎng)。

    可以用多種方法來(lái)增加在高性能CCD成像系統(tǒng)的信號(hào) - 噪聲比。 以減少CCD,其表現(xiàn)為暗電流,特殊設(shè)備的制造技術(shù)和操作模式有時(shí)被采用的半導(dǎo)體層內(nèi)的熱產(chǎn)生電荷。 是很常見(jiàn)的冷卻CCD來(lái)降低暗電流,以使用熱電或低溫制冷可以忽略的水平,或如果需要,液氮冷卻的極端的方法可以采取。 在一般情況下,高性能CCD傳感器表現(xiàn)出一個(gè)半減少暗電流為攝氏每5?9度,因?yàn)樗鼈儽焕鋮s到低于室溫的溫度,稱為“加倍溫度”的規(guī)范。 改善此比率通常持續(xù)約5至零下10度的溫度,*過(guò)該暗電流的減少而迅速減弱。 除了專門的電路和電子設(shè)計(jì),利用*的集成商和雙采樣方法過(guò)濾技術(shù)有時(shí)被用來(lái)去除讀出噪聲的某些組件。

    奧林巴斯顯微鏡

    因?yàn)楣庾釉肼暤腃CD信號(hào)的檢測(cè),不能由相機(jī)設(shè)計(jì)因素降低的固有屬性,它本質(zhì)上代表了“噪聲底限”,也就是*小可實(shí)現(xiàn)的噪聲電平,在相對(duì)影響,因?yàn)楣庾油康脑黾訙p少。 因此,理想的是操作成像系統(tǒng),它是由光子噪聲受限的條件下,與其它噪聲分量被降低到相對(duì)微不足道。 在低照明度條件下(假設(shè)暗噪聲是由CCD冷卻基本上消除),讀取噪聲大于光子噪聲和圖像信號(hào)被認(rèn)為是只讀的噪聲限制 。 相機(jī)的曝光時(shí)間(累積時(shí)間)可以增加,以收集更多的光子,并提高信噪比,直到一個(gè)點(diǎn)為止在該光子噪聲*過(guò)讀取噪聲和暗噪聲。 上面這個(gè)曝光時(shí)間,圖像被說(shuō)成是光子噪聲的限制 。

    可用于圖像形成的光子的數(shù)量有限,在許多顯微技術(shù)的一個(gè)關(guān)鍵因素,并且高性能的CCD照相機(jī)系統(tǒng)是專門設(shè)計(jì)來(lái)達(dá)到的光子噪聲受限工作模式比傳統(tǒng)的攝像機(jī),它通常從未實(shí)現(xiàn)在低得多的信號(hào)電平光子噪聲性能有限(和適當(dāng)?shù)母咝旁氡龋┰诘凸庹账健?/span> 在寬視場(chǎng)顯微鏡,這通常采用CCD攝像機(jī),可從標(biāo)本聚集體積的總信號(hào)可以由幾個(gè)數(shù)量級(jí),在很大程度上取決于所采用的成像技術(shù)和試樣本身發(fā)生變化。 10E6每秒(100萬(wàn)美元)的光子從焦點(diǎn)體積,極低的光照水平,的光子通量相當(dāng)于平均1光子/像素/秒分布在具有100萬(wàn)有效像素的傳感器的表面。 作為一個(gè)參照點(diǎn),暗適應(yīng)眼的*小檢出限為約40倍(40元光子/秒)。 正確設(shè)計(jì)的熒光顯微鏡通常會(huì)產(chǎn)生10E8從焦量10E9每秒光子,或100?1000光子/像素/秒,相同的100萬(wàn)像素的傳感器。 傳統(tǒng)的明場(chǎng)成像模式通常產(chǎn)生的照度水平,平均在整個(gè)感應(yīng)區(qū),5000至約40,000光子/像素/秒。 除非積分間隔是很短的,一個(gè)寬視場(chǎng)圖像的亮區(qū)可以產(chǎn)生每像素*過(guò)100,000光子共檢測(cè)到的信號(hào)。

    圖1呈現(xiàn)的信號(hào) - 噪聲比與積分(曝光)時(shí)間為一個(gè)典型的高性能CCD相機(jī)在低信號(hào)電平設(shè)計(jì)的成像,以固定在圖中所示的值的光子通量和傳感器特性的曲線圖。 在這種類型中,讀 - 噪聲有限區(qū)域和光子噪聲有限區(qū)域的曲線圖可以被識(shí)別,在曝光時(shí)間的量光子噪聲開(kāi)始*過(guò)讀取噪聲(約0.15秒為指定的傳感器和光束分離值在該圖中)。 因?yàn)楣庾釉肼曅盘?hào)的平方根關(guān)系,這兩個(gè)地區(qū)之間的這種分裂發(fā)生,而本總檢測(cè)每一個(gè)像素的信號(hào)大約是讀出噪聲值的平方的曝光時(shí)間。 例如,對(duì)于每個(gè)像素5的電子均方根讀噪聲規(guī)范,光子噪聲成為主要噪聲源時(shí)的曝光時(shí)間是足以導(dǎo)致每像素多于25檢測(cè)到的光子在現(xiàn)有的入射光子通量。 在交互式指南顯示一個(gè)類似于圖1中的曲線圖,但變化反映在圖形情節(jié),因?yàn)槊總€(gè)通過(guò)滑塊控制的變量進(jìn)行調(diào)節(jié)。 除了 計(jì)算出的SNR值,顯示在左側(cè),右側(cè)黃色的窗口更新檢測(cè)到的光子/像素的值,并在圖形的變化上部的紅色文字訊息,表示讀出噪音或光子噪聲占主導(dǎo)地位是否由滑塊所選擇的值。 紅色箭頭所示的繪制曲線作為當(dāng)前選定的積分時(shí)間的指示。 兩個(gè)主要的噪聲制度之間的過(guò)渡假設(shè)暗噪聲可以忽略不計(jì),這是典型的科學(xué)級(jí)CCD成像系統(tǒng)的操作,但其他情況都是可能的。 工作在高暗電流水平改變讀出噪聲和光子噪聲在一定條件下的相對(duì)價(jià)值的意義,在這種情況下暗噪聲可以壓倒信號(hào)和其他噪聲成分。

    奧林巴斯顯微鏡

    一些科學(xué)級(jí)CCD相機(jī)允許執(zhí)行一個(gè)片上像素合并功能作為另一種機(jī)制來(lái)提高信號(hào)的信噪比。應(yīng)當(dāng)認(rèn)識(shí)到,這種方法涉及到一個(gè)犧牲一些空間分辨率,以及在暗電流隨之增加。 通過(guò)提高CCD的信號(hào) - 噪聲比,所述成像系統(tǒng)是能夠達(dá)到的光子噪聲受限的條件在較低光水平和/或較短的曝光時(shí)間。 有些攝像系統(tǒng)會(huì)自動(dòng)利用像素組合模式的顯示器預(yù)覽圖像,提供更明亮的圖像,以快速的幀速率,這有利于標(biāo)本的定位和聚焦的顯示。 為了證明在計(jì)算信噪比這個(gè)分級(jí)的效果,本教程提供了對(duì)應(yīng)三種分級(jí)因素的單選按鈕。 按鈕標(biāo)簽表示的離散化的像素的數(shù)目如下:1的象素,沒(méi)有分級(jí);組合成一個(gè)16個(gè)像素,4×4像素陣列; 4像素,2×2像素陣列結(jié)合成一體。 圖2顯示了不同的分級(jí)值的曲線上繪制信噪比與曝光時(shí)間的變化的影響。 在本教程中用于計(jì)算信噪比所使用的公式修改為占分級(jí),如下圖所示

    SNR = MPQet / [ MPQet + MDt + Nr2 ]1/2

    在該修改方程中,符號(hào)M表示的離散化的像素的數(shù)量,并假設(shè)在每個(gè)這些像素的信號(hào)是相同的。 三條曲線繪制在同典型的CCD規(guī)格,并標(biāo)示在圖上,并為一個(gè)非常低的樣品的信號(hào)強(qiáng)度,產(chǎn)生的每個(gè)像素40的光子每秒鐘入射到傳感器上的光子通量。 注意,如果沒(méi)有像素組合,以實(shí)現(xiàn)光子噪聲有限的信號(hào)電平是必需的大約4秒的曝光時(shí)間。 通過(guò)實(shí)施16像素組合,等效SNR和每個(gè)像素檢測(cè)到的光子的總數(shù),只有0.25秒的曝光時(shí)間達(dá)到(參見(jiàn)圖2),這將允許爽快的預(yù)覽圖像以足夠的幀速率,以允許聚焦和試樣即使在低亮度圖像的定位。 另一個(gè)考慮是,使用4秒的積分時(shí)間獲取的圖像將受益于一個(gè)近似5倍的改善的信號(hào)噪聲比與使用16像素組合,相對(duì)于未像素合并模式。 在許多情況下,特別是在低光照水平,降低了噪音和所得到的改進(jìn)的圖像對(duì)比度的好處大于理論值的空間分辨率是固有的像素合并過(guò)程中的損失。